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腫瘤細胞培養實驗操作分析

更新時間:2017-03-14點擊次數:686

腫瘤細胞培養實驗原理:

是將機體內的某組織取出,分散成單細胞,在人工條件下培養使其生存并不斷生長、繁殖的方法。借助這種方法可以觀察細胞的分裂繁殖、細胞的接觸抑制、以及細胞的衰老,死亡等生命現象。

腫瘤細胞動物的選擇:

選擇大約一半足孕時間的胚胎,10-13天齡胚胎含有zui大數量的未分化的間質細胞,成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。
每組小鼠胚胎1個

實驗材料:
每組的超凈臺中有以下物品:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養皿1個,細胞培養瓶1個
4、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
5、細胞計數板1塊;
6、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
7、酒精燈1臺;

腫瘤細胞試驗操作步驟:
1)胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)
a.采用認可的方案處死嚙齒動物。 
b.立即在無菌超凈臺內用70%乙醇擦洗整個動物。
c.用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d.用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,取出含有胚胎的子宮,置于無菌的培養皿上。
e.剔除胚胎周圍的包膜,將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f.漂洗胚胎,去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

2)將1-2個胚胎轉移至一個小的無菌培養皿中,用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎, 用PBS漂洗。
3)在無菌狀態下,將絞碎的胚胎轉移于一50ml 的無菌離心筒中, 加入40ml 0.25%的無菌胰蛋白酶,用攪拌棒輕輕攪動 。
4)在溫暖的環境中或置于37 °C培養箱中輕輕搖動15分鐘。
5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降,將含有懸浮細胞的液體轉移至一無菌50ml的離心管中,該管內按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,胰蛋白酶。

6)加人新鮮胰蛋白酶溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中,重復步驟4和5。
7)離心混合的細胞懸液,1200r/rain,5分鐘,棄上清。
8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細胞,按步驟7再次離心。
9)用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止。

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