干細胞交感神經系統在維持機體的正常功能和對環境的適應性反應中起著十分重要的作用。交感神經細胞培養特別有助于神經細胞發育和可塑性研究，利用體外培養系統可進行交感神經細胞的發生、死亡、形態和生化發育、遞質表形的獲得，以及靶組織與傳入纖維的突觸形成的研究。此外，通過體外培養系統可獲得關于神經營養因子、激素，細胞因子等調節交感神經元發育的信息，了解傳入纖維的輸入以及與靶組織的的機制。

1、材料和方法

實驗用出生當天的昆明種大鼠，在無菌條件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖鑷在解剖顯微鏡下找到氣管兩側的頸總動脈,并以此為標志,在頸總動脈分為頸內外動脈交叉處找到上頸交感節, 取出上頸交感節, 置于含 1 % 膠元酶(Collagenase)和1 % 消化酶(Dispase)的2ml混合消化液中消化(37℃， 1 h)分散后，用種植(Plating)培養液稀釋成0.2×105個細胞/ml密度的的細胞懸液;接種于涂有小牛皮膠或以大鼠腦皮層膠質細胞為背景的35mm塑料培養皿中，每皿2ml細胞懸液置。置標本于36℃、10%CO2培養箱中培養。24h后傾去培養皿內種植培養液,改用飼養(Feeding)培養液培養。接種第3d, 在培養皿中分別加入細胞分裂抑制劑5-氟-2'-脫氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml, 作用48 h后更換新鮮飼養培養液,以后每周換液兩次, 每次更換一半新鮮飼養培養液。

2、培養液成份

干細胞種植培養液: 80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L);10%胎牛血清;10%馬血清;NGF 20ng/ml; 谷氨酰胺100μg/ml。脫氧核糖核酸酶 I 40μg/ml。

飼養培養液: 95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L,);5%馬血清; NGF 20 ng/ml;神經營養素 1ml/100ml;谷氨酰胺100μg/ml。

3、新生大鼠交感節神經元的生長分化和形態特征

新生大鼠交感節神經元在含 NGF 的培養液中種植后4h, 細胞即開始貼附在膠元薄膜或在皮層膠質細胞層上生長, 交感神經元的胞體一般為圓形, 有時亦可見橢圓或梭形,體積較大, 直徑約8-14μm左右,胞體周圍呈現一圈光暈,神經元的細胞核大多偏于胞體一側,核仁明顯,亦可見雙核神經元 。接種后24h, 大部分貼壁神經元開始長出突起。培養2-3天后,神經元突起逐漸增多并延長, 形成稀疏的網絡。隨著培養時間的延長, 神經突起網絡變得更加稠密。神經干細胞的主干和分枝明顯延長并增粗, 神經元的胞體逐漸增大。大鼠交感神經元可維持培養1-2個月。