一、腫瘤細胞實驗目的

能獨立地進行用于細胞培養的各種器皿的清洗與消毒，掌握干熱滅菌法、濕熱滅菌法和濾過除菌法的操作，了解化學消毒法的使用方法。

二、實驗原理

清洗與消毒是組織培養實驗的*步，是組織培養中工作量zui大，也是zui基本的步驟。體外培養細胞所使用的各種玻璃或塑料器皿對清潔和無菌的要求程度很高。細胞養不好與清洗不*有很大關系。清洗后的玻璃器皿，不僅要求干凈透明，無油跡，而且不能殘留任何物質。如有毒的化學物質，哪怕殘留0.1個，也可能影響細胞生長。滅菌手段的選擇十分重要，對不同的物品需采用不同的滅菌方法。假如選用的方法不對，即使達到了無菌卻使被滅菌藥品喪失了營養價值、生物學特性或其他使用價值也不行。以下在每種滅菌步驟中都介紹其使用范圍。

三、實驗材料、用品

1、材料：無臭氧型紫外燈，微孔濾膜(直徑25)：孔徑為0.22μm，微孔濾膜(直徑90)：孔徑為0.22 μm，過濾器(直徑25)。

2、藥品：70%或75%酒精，0.1%新潔爾滅，煤酚皂溶液(來蘇兒水)，0.5%過氧乙酸，乳酸，37%甲醛，高錳酸鉀，NaOH，鹽酸，重鉻酸鉀，濃硫酸(工業)，DEPC水[體積分數0.1%的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。

3、儀器：超凈臺，干燥箱，高壓鍋，過濾器，過濾泵。

四、實驗步驟

(一)實驗器具清洗

l 玻璃類 1、主要有：培養瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，離心管，試管，培養皿等。

2、清洗步驟：

泡在含有洗潔凈的自來水中→撈出來用毛刷將實驗器具各個面刷洗至少25遍→自來水沖洗25遍→過一遍一蒸水→泡入鉻酸,過夜(24h左右)→從鉻酸中撈出器具，自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱內烘干→收入柜子備用→用前高溫滅菌(121℃，25min)→烘干→使用。

注意：新的玻璃器具先要泡鹽酸1天，然后清洗步驟與上面相同。

l 塑料類

1 塑料類器具主要包括：孔板，大槍頭，瓶蓋，濾器，采血管等。

2 清洗步驟：

(1)孔板，采血管

泡在有洗潔凈的自來水中→用超聲清洗儀超聲3遍(每遍1小時，200C)→在含有洗潔凈的自來水中用毛刷或者紗布將各個面刷洗至少25遍→過一遍一蒸水→泡入鹽酸過一個禮拜→從鹽酸中撈出后自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水(每遍3次)，三遍三蒸水→烘箱內烘干→收入柜子→用前包裝好照鈷→使用

(2)大槍頭，蓋子，濾器

腫瘤細胞在含有洗潔凈的自來水中用毛刷或者紗布將各個面刷洗至少25遍→用超聲清洗儀超聲1遍(每遍45分鐘，200C)→自來水沖洗→過三遍一蒸水(每遍3次)，三遍三蒸水→烘箱內烘干→收入柜子→用前包裝好滅菌→使用

注意：(1)烘孔板時溫度不應太高，烘干后用報紙包裹，裝入箱子內，照鈷，便可使用。

(2) 新的培養瓶蓋子泡舊5%稀鹽酸1天→再用2%NaOH煮20min →自來水沖洗→洗潔精清洗→用超聲清洗儀超聲1遍(每遍45分鐘，200C)→沖洗15遍→過三遍一蒸(每遍3次)→過三遍三蒸水→烘干使用
1,2,4,5-環己烷四甲酸二酐(>98.0%(T))    英文名稱：    1,2,4,5-Cyclohexanetetracarboxylic Dianhydride    質量規格：    >98.0%(T)            CAS號：    2754-41-8    
1,2,4,5-四甲基苯(NMR定量標準品,99.8%(GC))    英文名稱：    1,2,4,5-Tetramethylbenzene    質量規格：    NMR定量標準品,99.8%(GC)            CAS號：    95-93-2    
1,2,4,5-四氯苯(標準品)    英文名稱：    1,2,4,5-Tetrachlorobenzene    質量規格：    分析標準品            CAS號：    95-94-3    
1,2,4,5-四氯苯標準溶液(0.104mg/ml,基體:異辛烷)    英文名稱：    1,2,4,5-Tetrachlorobenzene solution    質量規格：    0.104mg/ml,基體:異辛烷            CAS號：    95-94-3    
腫瘤細胞