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技術文章
ATCC細胞肉眼觀察檢測方法
2017
6-15ATCC細胞一般常規檢查用肉眼即可觀察，主要看培養液的顏色和透明度的變化。培養細胞的觀察檢測方法大多數細胞適于在pH7.2～7.4條件下生長，低于pH6.8或高于pH7.6對細胞有害，甚至造成細胞退化或死亡。細胞對堿性不如對酸性的變化耐受，偏酸的條件比偏堿的環境對細胞生長有利。隨細胞數量的增多、代謝加強，釋放CO2增多，使pH降低。為了維持培養基恒定的pH，多在培養基中加入磷酸鹽等緩沖劑。對細胞無毒性，也不起緩沖作用，主要作用是防止pH迅速變動，在開瓶通氣培養或活細胞觀察時能...+ -
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細胞常見的轉染方法分析
2017
6-13ATCC細胞常見的轉染方法有：1.磷酸鈣法：該方法利用磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞原理得到瞬時或穩定轉染結果，操作簡便但重復性差，不可用于原代細胞的轉染。2.DEAE-右旋糖苷法：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞，可用于瞬時轉染，方法相對簡便、結果可重復但對細胞有一定的毒副作用。3.電穿孔法：利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入。穩定轉染，瞬時轉染均適用。適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大，...+ -
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腫瘤細胞培養技術操作注意事項
2017
6-81.腫瘤細胞實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。2.無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、...+ -
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轉化細胞實驗室*儀器簡單介紹
2017
6-6一、CO2培養箱CO2培養箱是轉化細胞培養的*儀器，它為細胞提供了一個體外培養的舒適環境，如適宜的溫度、濕度、酸堿度、O2濃度等。細胞在體外培養時很容易受到各種細菌、微生物的感染，因此，CO2培養箱的滅菌和抑菌能力就顯得尤為重要。二、純水系統細胞培養用水一般要求雙蒸水(0.8MΩ以上)，實際上普通蒸餾水經玻璃器皿中按標準方法蒸餾二次得到的雙蒸水是不能滿足要求的，而且水中的內毒素直接參與細胞凋亡，血清中內毒素含量越低，對細胞毒性越小，越利于細胞的生長和傳代;內毒素含量過高，會直...+ -
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腫瘤細胞培養時注意事項
2017
6-1腫瘤細胞培養時注意事項1.玻璃吸管和玻璃培養瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時以上;2.無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈，紫外線照射40分鐘以上;各種培養板照射3小時以上;3.培養基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗:將血清按10%加入培養基內，用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養基5-10ml置培養箱內培養2-3天，肉眼見無渾濁或沉淀等異物。分裝后置4度保存;4.消化液(pH7.8)或其它加入液，應用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾...+ -
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ATCC細胞培養過程中出現的問題和解決方法
2017
5-25一、培養ATCC細胞不貼壁可能原因：胰蛋白酶消化過度支原體污染培養基pH值過堿（NaHCO3分解）細胞老化接種細胞起始濃度太低或太高解決方法：縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度分離培養物，檢測支原體。清潔支架或培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2啟用新的保種細胞調節*接種細胞濃度二、懸浮細胞成簇可能原因：培養液中含鈣、鎂離子；支原體污染；蛋白酶過度消化使得細胞裂解；DNA污染解決方法：用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕巧吹吸細胞獲得...+ -
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介紹在細胞培養過程中經常用到的培養用液有哪些
2017
5-23一、干細胞平衡鹽溶液(balancedsaltsolution,BSS):主要是由無機鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細胞滲透壓平衡，保持pH穩定及提供簡單的營養。主要用于取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、配制其他試劑等。zui簡單的BSS是Ringer。D-Hank"s與Hank"s的一個主要區別是前者不含有Ca2+、Mg2+，因此D-Hank"s常用于配制胰酶溶液。Earle平衡液含有較高的NaHCO3(2.2g/L),適合于5%CO2的培養條件，Hank"s平衡液僅含有0....+ -
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分析ATCC細胞培養技術注意事項
2017
5-181.ATCC細胞實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。2.無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管...+ -
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分析干細胞的幾大特點
2017
5-161.生命的起源細胞人體起源一個單細胞受精卵（*代干細胞），經歷卵裂（干細胞持續擴增，增加細胞數量）、胚層出現（干細胞開始分化出功能細胞）、組織器官形成（功能細胞的有序排列）及胚后發育這樣一個連續過程。2.維持人體動態平衡的種子細胞人體通過干細胞增殖和分化來實現細胞更新。成年并不意味著細胞增殖和細胞分化的結束，而仍然存在著受調控的組織更新過程。在一些組織中，如骨髓、表皮等，新細胞可不斷地產生，以補充因分化而衰老、死亡的細胞。干細胞的增殖保持著機體內細胞的動態平衡。3.干細胞功能...+ -
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ATCC細胞凍存的操作步驟
2017
5-9一、ATCC細胞材料（一）儀器1.凈化工作臺2.離心機3.恒溫水浴箱4.冰箱（4℃、-20℃、-70℃）5.倒置相差顯微鏡6.培養箱7.液氮冰箱（二）玻璃器皿1.吸管（彎頭、直頭）2.培養瓶3.玻璃瓶（250ml、100ml）4.廢液缸（三）塑料器皿1.吸頭2.槍頭3.膠塞4.移液管（10ml）5.15ml離心管6.凍存管（1～2ml）（四）其他物品1.微量加樣槍2.紅血球計數板3.記號筆4.醫用橡皮膏5.移液槍（五）試劑1.D-Hanks液2.小牛血清3.培養液4.雙抗（青...+ -
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細胞培養基常用幾種重要的添加成份及使用過程中應注意的問題
2017
5-4酚紅在ATCC細胞培養基中用作pH值的指示劑，一般情況下，可以通過酚紅的指示作用判斷培養基的pH值，中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色；但低血清或是無血清細胞培養基中酚紅的含量與普通細胞培養基中的酚紅含量不同，不能通過肉眼觀察或通過經驗來判定pH值，建議使用pH計進行測定。酚紅通常對含血清的細胞培養基的生物制品質量并不會產生明顯影響，也可通過純化技術去除，但酚紅在無血清細胞培養基中可能帶來胞內鈉/鉀失衡，影響細胞生長，這種作用能被血清所中和或減輕。因此，酚紅并不是細胞培...+ -
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RNAi基因敲除的優點及應用
2017
4-27RNAi基因敲除的優點及應用①.干細胞比用同源重組法更加簡便，周期大大縮短。②.對于哺乳動物，如對于一些敲除后小鼠在胚胎時就會死亡的基因，可以在體外培養的細胞中利用RNAi技術研究它的功能。③.由于RNAi能特異的阻斷基因的表達，它成為研究信號傳導通路的良好工具。④.RNAi還被用來研究在發育過程中起作用的基因，如可用RNAi來阻斷某些基因的表達，來研究他們是否在胚胎干細胞的增殖和分化過程中其起著關鍵作用。YAL011WBY4743,homozygousdiploid[303...+
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